형광염료 선택 가이드
AF, Cyanine, BDP® 어떤 Fluorescent Dye를 선택해야 할까?
AF488, AF568, AF647부터 Cyanine3, Cyanine5, Cyanine7 및 BDP®까지. 형광 파장, 밝기, photostability, 수용성 및 실험 목적에 따른 fluorescent dye 선택 방법을 정리했습니다.
형광염료 선택, 파장만 보면 될까요?
Fluorescent dye를 선택할 때 가장 먼저 확인하는 것은 excitation 및 emission wavelength입니다. 하지만 동일한 파장대의 형광염료라도 밝기, photostability, hydrophilicity 및 biomolecule conjugation 후의 특성이 다를 수 있습니다.
특히 antibody labeling, protein conjugation, fluorescence microscopy, flow cytometry, live-cell imaging 및 in vivo imaging에서는 실험 조건에 맞는 fluorophore 선택이 중요합니다.
Green: AF488 / BDP® FL
Orange-Red: AF568 / Cyanine3 계열
Far-Red: AF647 / Cyanine5 계열
NIR: Cyanine7 계열
파장대별 대표 형광염료
| 형광 영역 | 대표 Dye | 일반적인 검출 영역 | 추천 Application |
|---|---|---|---|
| Green | AF488, BDP® FL | FITC / FAM 계열 채널 | Microscopy, flow cytometry, general labeling |
| Orange | Cyanine3, Cyanine3B, AF568 | TRITC / Cy3 계열 채널 | Protein labeling, microscopy |
| Red / Far-Red | AF647, Cyanine5, sulfo-Cyanine5 | Cy5 / far-red 채널 | Antibody labeling, multiplex imaging |
| NIR | Cyanine7, sulfo-Cyanine7 | Near-infrared | NIR imaging, in vivo imaging |
AF Fluorescent Dyes
AF 계열 형광염료는 높은 brightness와 photostability가 필요한 fluorescence imaging 및 biomolecule labeling에 활용할 수 있습니다.
Cyanine Fluorescent Dyes
Cyanine dye는 visible부터 near-infrared 영역까지 넓은 spectral range를 제공하기 때문에 biomolecule labeling 및 fluorescence imaging에 널리 활용되는 fluorophore 계열입니다.
Cyanine3 / Cyanine3B
Yellow-orange 영역의 fluorescence를 제공하며 fluorescence microscopy, nucleic acid labeling, protein labeling 등에 사용할 수 있습니다.
Cyanine5
Far-red 영역의 대표적인 fluorophore입니다. 긴 파장을 사용하기 때문에 green 또는 orange dye와 함께 multiplex labeling을 구성하기 좋습니다.
Cyanine7
Near-infrared(NIR) 영역의 fluorescence를 제공하며 biological tissue의 autofluorescence 영향을 줄여야 하는 fluorescence imaging 및 in vivo imaging 연구에 활용할 수 있습니다.
Cyanine vs sulfo-Cyanine
Cyanine 계열 제품을 선택할 때 자주 접하게 되는 것이 sulfo-Cyanine입니다.
Sulfonate group이 도입된 sulfo-Cyanine dye는 일반적으로 수용성이 향상되어 aqueous biological system에서 protein 및 antibody conjugation을 진행할 때 유용합니다.
| 특징 | Cyanine | sulfo-Cyanine |
|---|---|---|
| Water Solubility | 제품에 따라 제한적 | 일반적으로 높음 |
| Hydrophilicity | 상대적으로 낮음 | 높음 |
| 추천 용도 | General fluorescent labeling | Protein / antibody conjugation in aqueous systems |
BDP® Fluorescent Dyes
Lumiprobe의 BDP® dye는 borondipyrromethene 계열 fluorophore로, 높은 brightness와 photostability가 필요한 fluorescence labeling에 사용할 수 있습니다.
예를 들어 BDP® FL은 FAM/FITC와 유사한 green fluorescence 영역에서 사용할 수 있어 기존 fluorescence detection system에 적용하기 편리합니다.
실험 목적별 Fluorescent Dye 선택
| 실험 목적 | 우선 고려할 Dye | 선택 이유 |
|---|---|---|
| General fluorescence labeling | AF488 / BDP® FL | 일반적인 green fluorescence 장비와 높은 호환성 |
| Antibody labeling | AF568 / AF647 / sulfo-Cyanine5 | 밝은 signal 및 다양한 multiplex 조합 |
| Multiplex imaging | AF488 + AF568 + AF647 | 서로 다른 spectral channel 활용 |
| Aqueous protein conjugation | sulfo-Cyanine 계열 | 높은 hydrophilicity와 water solubility |
| NIR / in vivo imaging | Cyanine7 / sulfo-Cyanine7 | Near-infrared detection |
Dye를 골랐다면 Reactive Group을 선택하세요
형광 파장을 선택한 다음에는 어떤 functional group으로 biomolecule에 dye를 연결할 것인지 결정해야 합니다.
Primary amine labeling
Protein / antibody labeling
Thiol labeling
Cysteine conjugation
Copper-free click chemistry
Bioorthogonal labeling
Fast IEDDA chemistry
Rapid bioorthogonal conjugation
Fluorescent Labeling Reagent 선택 순서
Lumiprobe Fluorescent Labeling Reagents
Lumiprobe는 다양한 spectral range의 fluorescent dye와 여러 reactive group을 조합한 labeling reagent를 제공하고 있습니다.
- AF fluorescent dyes
- Cyanine & sulfo-Cyanine dyes
- BDP® fluorescent dyes
- NHS ester labeling reagents
- Maleimide derivatives
- Azide / DBCO click chemistry reagents
- TCO / Tetrazine bioorthogonal reagents
어떤 Fluorescent Dye를 선택해야 할지 고민되시나요?
사용 중인 장비의 laser/filter, 원하는 fluorescence channel, labeling할 biomolecule 및 필요한 conjugation chemistry를 알려주시면 적합한 Lumiprobe 제품을 검토해드립니다.
알앤디메이트 | 제품 견적 및 납기 문의
Tel. 070-8028-3500