ELISA Datasheet에 내 Sample Type이 없다면?
바로 포기하기 전에 확인해야 할 2가지 실험

Serum용 ELISA kit를 tissue homogenate에 사용할 수 있을까요? Plasma에서 검증된 assay를 cell lysate에 적용할 수 있을까요? Datasheet에 sample type이 없다는 것은 반드시 사용할 수 없다는 의미는 아닙니다. 다만 새로운 matrix에서 정확한 정량이 가능한지 직접 검증해야 합니다.

왜 같은 Analyte인데 Sample에 따라 결과가 달라질까요?

ELISA는 target protein만 측정하는 것처럼 보이지만 실제 반응은 sample 안에 존재하는 수많은 성분의 영향을 받을 수 있습니다.

Serum, plasma, cell culture supernatant, cell lysate, tissue homogenate와 urine은 protein, salt, lipid, detergent, protease 및 기타 interfering substance의 조성이 서로 다릅니다.

이러한 sample matrix가 antibody binding 또는 enzyme reaction에 영향을 주면 matrix effect가 발생할 수 있습니다.

따라서 standard curve가 완벽하게 나왔다고 해서 실제 biological sample의 정량까지 정확하다고 볼 수는 없습니다.

첫 번째 확인: Spike-and-Recovery

가장 기본적인 방법은 sample에 알고 있는 양의 target standard를 첨가한 뒤 얼마나 정확하게 다시 측정되는지 확인하는 것입니다.

Recovery (%) = (Spiked sample − Unspiked sample) / Added analyte × 100

예를 들어 sample에 100 pg/mL의 standard를 추가했는데 원래 sample 대비 95 pg/mL가 증가했다면 recovery는 약 95%입니다.

Boster Bio의 ELISA validation에서는 대표적으로 80–120% recovery를 acceptance range로 사용합니다.

Recovery가 지나치게 낮거나 높다면 sample matrix가 assay response를 억제하거나 증가시키고 있을 가능성을 검토해야 합니다.

두 번째 확인: Dilution Linearity

Spike recovery가 괜찮더라도 한 가지 dilution에서만 결과를 확인해서는 matrix effect를 놓칠 수 있습니다.

대표 sample을 여러 단계로 희석해 측정합니다.

1:2 → 1:4 → 1:8 → 1:16

각 dilution에서 얻은 concentration에 dilution factor를 다시 곱해 원래 sample의 concentration을 계산합니다.

Assay가 matrix의 영향을 크게 받지 않는다면 서로 다른 dilution에서도 back-calculated concentration이 비슷하게 유지되어야 합니다.

Boster의 ELISA validation에서는 dilution linearity에서도 대표적으로 80–120% observed/expected 범위를 사용합니다.

Recovery와 Linearity는 같은 것을 보는 것이 아닙니다

Matrix Effect가 발견되었다면?

① Sample을 더 희석해 봅니다.
Interfering component도 함께 희석되므로 가장 간단하면서 효과적인 해결책일 수 있습니다.

② Standard와 Sample Matrix를 맞춥니다.
가능하면 matrix-matched standard 또는 적절한 surrogate matrix를 검토합니다.

③ Sample Preparation을 점검합니다.
Hemolysis, lipemia, particulate matter, detergent concentration, freeze-thaw history 등이 결과에 영향을 줄 수 있습니다.

④ Assay Range를 다시 확인합니다.
Matrix effect처럼 보이는 현상이 실제로는 ULOQ 초과 또는 지나치게 높은 analyte 농도 때문일 수도 있습니다.

Datasheet에서 Sample Type보다 먼저 볼 것은?

ELISA kit를 선택할 때 sensitivity 숫자만 비교하기 쉽지만, 실제 sample과 assay의 compatibility를 먼저 확인하는 것이 중요합니다.

다음 항목을 함께 확인해 보세요.

✓ Validated sample matrix

✓ Recommended sample dilution

✓ Expected biological concentration

✓ Assay detection range

✓ Spike recovery data

✓ Dilution linearity data

✓ Intra-assay / inter-assay precision

✓ Sample preparation requirement

새로운 Sample Matrix 검증 예시

STEP 1. 대표 sample 2–3개 선정

STEP 2. Unspiked / spiked sample 준비

STEP 3. Low / medium / high spike level 검토

STEP 4. Serial dilution 준비

STEP 5. ELISA 수행

STEP 6. Spike recovery 계산

STEP 7. Back-calculated concentration으로 dilution linearity 확인

STEP 8. 사전에 정의한 acceptance criterion에 따라 matrix suitability 판단

내 Sample에 맞는 ELISA Kit를 찾고 계신가요?

알앤디메이트에서는 target protein뿐 아니라 species, sample matrix, 예상 농도, 필요한 sensitivity와 assay range를 함께 검토하여 적합한 ELISA kit를 찾아드립니다.

Datasheet에 사용하려는 sample type이 없는 경우에도 가능한 제품과 validation 방법을 함께 검토할 수 있습니다.