PCR 시약에서 Glycerol-Free 효소가 필요한 이유는 무엇일까?

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PCR 시약에서 Glycerol-Free 효소가
필요한 이유는 무엇일까?

일반적인 PCR에서는 크게 신경 쓰지 않았던 glycerol이 동결건조 PCR 시약이나 분자진단 키트 개발에서는 중요한 formulation 조건이 될 수 있습니다. Glycerol-Free enzyme이 필요한 이유와 적용 가능한 제품군을 살펴봅니다.

Taq DNA polymerase, reverse transcriptase, RNase inhibitor 등 많은 효소 제품에는 효소의 안정성을 유지하기 위해 glycerol이 포함되어 있습니다.

일반적인 liquid PCR workflow에서는 이러한 formulation이 문제가 되지 않는 경우가 많습니다. 하지만 동결건조(Lyophilization), premix 개발, point-of-care molecular diagnostics처럼 최종 reagent formulation 자체가 중요한 경우에는 이야기가 달라질 수 있습니다.

Glycerol-Free는 단순히 “첨가물이 하나 빠진 효소”가 아닙니다.
PCR reagent를 동결건조하거나 전체 formulation을 직접 설계해야 하는 경우, 효소에 포함된 glycerol까지 고려하여 원료를 선택할 필요가 있습니다.

효소에는 왜 Glycerol이 들어갈까?

Glycerol은 단백질 효소의 안정적인 보관을 위해 널리 사용되는 formulation component입니다. 특히 냉동 상태에서 효소를 안정적으로 유지하고 반복적인 사용 과정에서 activity를 유지하는 데 도움이 될 수 있습니다.

따라서 conventional PCR enzyme에서는 glycerol-containing formulation을 흔히 볼 수 있습니다.

그런데 왜 Glycerol-Free가 필요할까?

01. Lyophilized PCR Reagent

동결건조 reagent를 개발할 때는 효소뿐 아니라 전체 formulation의 excipient 조성을 함께 설계해야 합니다.

02. Custom PCR Master Mix

개발자가 glycerol 농도를 직접 조절해야 하는 경우 glycerol-free raw enzyme이 formulation 자유도를 높일 수 있습니다.

03. Molecular Diagnostic Kit

장기 보관성과 사용 편의성을 고려한 진단용 PCR reagent 개발에서 원료 formulation은 중요한 설계 요소가 됩니다.

04. LAMP / Isothermal Amplification

LAMP와 같은 isothermal amplification system에서도 glycerol-free polymerase와 reverse transcriptase를 활용할 수 있습니다.

Hzymes Molecular Biology Raw Materials

Hzymes의 Molecular Product Selection Guide에는 PCR 및 LAMP reagent 개발을 위한 다양한 glycerol-free enzyme이 포함되어 있습니다.

Product Application
Hot-start Taq DNA Polymerase
(Antibody Modified; Glycerol-Free)
PCR / qPCR reagent development
FS Hotstart Taq DNA Polymerase
(Antibody Modified; Glycerol-Free)
PCR formulation development
M-MLV Reverse Transcriptase
(Glycerol-Free)
RT-PCR / RT-qPCR
RNase Inhibitor
(Glycerol-Free)
RNA amplification workflows
Heat-Labile UDG
(Glycerol-Free)
Carryover contamination control
Bst DNA Polymerase V2
(Glycerol-Free)
LAMP / Isothermal amplification
RTL Reverse Transcriptase 2.0
(Glycerol-Free)
RT-LAMP

효소만 바꾸면 동결건조 PCR reagent가 완성될까?

그렇지는 않습니다.

Lyophilized PCR reagent의 성능은 polymerase뿐 아니라 buffer, dNTP, stabilizer, primer/probe, salt concentration 및 동결건조 process 조건 등 여러 요소의 영향을 받을 수 있습니다.

따라서 commercial molecular diagnostic reagent를 개발하는 경우에는 단순히 개별 효소를 선정하는 것을 넘어 전체 master mix와 lyophilization condition을 함께 검토해야 합니다.

Liquid부터 Lyophilized Beads까지

Hzymes의 PCR 및 LAMP 제품군에는 raw enzyme뿐 아니라 Liquid Lyoph-Ready, Freeze-Dryable Liquid, Lyophilized Beads 및 In Situ Lyophilization 형태의 master mix도 포함되어 있습니다.

또한 PCR 및 LAMP reagent에 대해 primer/probe design, reagent performance optimization, lyophilization process development, CDMO, OEM 및 custom kit development 서비스도 제공합니다.

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알앤디메이트에서 Glycerol-Free enzyme, Hot-start Taq, Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, UDG, Bst Polymerase, dNTP 및 PCR/LAMP Master Mix 등 필요한 분자진단 원료의 사양과 공급 가능 여부를 확인해드립니다.

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